本篇文章给大家谈谈dmso对pcr有什么作用，以及dmso dna对应的知识点，希望对各位有所帮助，不要忘了收藏本站喔。

本文目录一览：

• 1、模板浓度低用什么pcr
• 2、聚合酶链反应的反应体系
• 3、在PCR过程中加DMSO起到什么作用
• 4、PCR体系中各成分的作用以及程序的设计
• 5、...条带很亮但是目的条带下有很多拖尾已经加过dmso提高引物的特异性...

模板浓度低用什么pcr

1、是的啊，可以用PCR产物做模板再PCR一次。

2、PCR的模板一般要求是10-100ng，最低，高于这个量一般都没有问题。模板量太多会对扩增有一定的抑制作用。

3、以PCR产物为模板，只要引物，体系对，怎么P怎么出。你的模板就是PCR产物，浓度再低也没事，稀释100倍没问题。

聚合酶链反应的反应体系

使(G C)%含量高的模板易于完全变性，在反应体系中加入DMSO使PCR产物直接测序更易进行，但超过10%时会抑制Taq DNA聚合酶的活性，因此，大多数并不使用DMSO。

聚合酶链式反应简称PCR（英文全称：Polymerase Chain Reaction）， 聚合酶链式反应 具体内容点击： 聚合酶链式反应，简称PCR。

DNA聚合酶链式反应（PCR）现在有些PCR因为扩增区很短，即使Taq酶活性不是最佳也能在很短的时间内复制完成，因此可以改为两步法，即退火和延伸同时在60～65℃间进行，以减少一次升降温过程，提高了反应速度。

聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，为最常用的分子生物学技术之一。

典型的PCR反应体系由如下组分组成：DNA模板、反应缓冲液、dNTP、MgCl两条合成的DNA引物、耐热DNA Taq聚合酶（　Taq酶是从水生栖热菌 Thermus Aquaticus （ Taq ）中分离出的具有热稳定性的DNA 聚合酶。

聚合酶链反应（PCR）的基本原理是一种酶促合成反应。即在模板DNA、引物和脱氧核糖核苷酸存在下，在DNA聚合酶的作用下，使DNA链扩增延伸。

在PCR过程中加DMSO起到什么作用

1、DMSO还会抑制Taq酶，但对MMLV则无抑制效果。可以增加Taq酶的量解除这种抑制。

2、加入DMSO利于减少DNA的二级结构，使G、C含量高的模板易于完全变性，在反应体系中加入DMSO使PCR产物直接测序更易进行。

3、DMSO可以降低DNA的二级结构，所以通常在扩增GC含量很高的基因样本的时候都会添加。但是，DMSO 也会大大降低Taq 聚合酶（Taq polymerase）的活性（activity）。

4、细胞冻存时DMSO的浓度一般为10%，之所以加它是因为DMSO是一种渗透性保护剂，能够降低细胞冰点，减少冰晶的形成，减轻自由基对细胞损害，改变生物膜对电解质、药物、毒物和代谢产物的通透性。

5、过量DMSO显著降低模板浓度低pcr。DMSO通常经验性地用于提高PCR扩增的效率，但是过量的DMSO可以显著降低特异序列的扩增效率，尤其是导致非特异性扩增的现象却被忽视。模板浓度过低，退火温度过高，可以做个梯度PCR试一下。

6、辅助成分，常见的有DMSO、甘油等，主要用来保持酶的活性和帮助DNA解除缠绕结构。

PCR体系中各成分的作用以及程序的设计

主要成分：有两端引物，Taq DNA聚合酶 模板DNA 合成DNA的核苷酸。主要程序：1。模板DNA的变性，两条链解开。2。引物模板退火，二者碱基配对 3。DNA聚合酶以四种核甘酸为底物，在引物引导下合成和模板互补的DNA新链。4。

第一，PCR反应体系由引物、4 种dNTP、Taq DNA聚合酶、靶序列DNA和PCR反应缓冲液体系组成。第二，PCR反应中，引物设计需特别注意，其他反应体系可以有商品化的产品出售购买。

Mg2+：增加特异性 酶及buffer：催化反应 PCR反应程序：变性，退火，延伸。一般来说，94度变性；退火温度依你的引物而定，延伸时间依你使用的酶及片段大小而定。

基本原理：PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。

...条带很亮但是目的条带下有很多拖尾已经加过dmso提高引物的特异性...

特异性除了添加dmso，反应温度可以提高，反应循环数可以减少，引物和模板的量可以减少。如果这些都不行，就只能重新设计引物了。

怎么不去小木虫上问问啊，百度知道还是不太学术的地方。

两个方法：换酶，用高保真酶进行扩增；在已有体系里面加入1%-5%不等的DMSO；可以试试看。

这是因为在扩增前加热可促进引物的特异复性与延伸，因此增加了有效引物的长度。 PCR促进剂： 二甲基亚砜(DMSO)：许多耐热DNA聚合酶厂定推荐在PCR反应中加入10%DMSO，这可能是DMSO有变性DNA的作用。

dimer亮不亮，（自身发夹一般不会有太大影响）；模板的话，要看看GC含量高不高，模板质量好不好。引物不好只能重新设计。模板不好可以加点DMSO（GC含量高），或者重新提取。

不过有人认为在 PCR仪上95度变性5min也同样达到目的，而且成功试过通过延长退火时间也可以消除引物二聚体。

dmso对pcr有什么作用的介绍就聊到这里吧，感谢你花时间阅读本站内容，更多关于dmso dna、dmso对pcr有什么作用的信息别忘了在本站进行查找喔。