什么时候用梯度洗脱：梯度洗脱时间
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蛋白质水解产物阳离子交换柱层析时的洗脱顺序？
阴离子交换基质结合带有负电荷的蛋白质，所以这类蛋白质被留在柱子上，然后通过提高洗脱液中的盐浓度等措施，将吸附在柱子上的蛋白质洗脱下来。结合较弱的蛋白质首先被洗脱下来。
谷氨酸和谷胱甘肽最先洗脱，其次是血红蛋白，最后是细胞色素C，谷氨酸和谷胱甘肽达不到分离的效果，因为二者分子量小于Sephadex-G-100的分离范围。
洗脱顺序先后依次是：天冬氨酸、亮氨酸、组氨酸。原因：氨基酸与阳离子交换树脂的静电引力大小依次是 碱性氨基酸＞中性氨基酸＞酸性氨基酸，所以洗脱的顺序就先是酸性氨基酸，然后是中性氨基酸，最后是碱性氨基酸。
DEAE纤维柱层析是离子交换层析（中强碱型），在PH大于7时，最先洗脱出来的酸性蛋白质（带负电），依次类推。2，用sephadex-50凝胶柱层析是根据蛋白质分子量大小来洗脱的，分子量大的最先出来，小的最后。
高效液相色谱分析法为什么采用梯度淋洗
当被分离组分较复杂时，等梯度洗脱难以将组分很好的分离并完全洗脱，就得考虑梯度洗脱了。液相色谱的梯度洗脱作用类似于气相色谱的程序升温，总之，为了达到更好的分离效果。
色谱法利用不同物质在不同相态的选择性分配，以流动相对固定相中的混合物进行洗脱，混合物中不同的物质会以不同的速度沿固定相移动，最终达到分离的效果。
高压梯度：用两台高压输液泵将两种溶剂输入 低压梯度：在常压下将两种溶剂（或多元溶剂）混合，然后用高压输液泵将流动相输入到色谱柱中。梯度洗脱可提高分离度、缩短分离时间、降低最小检测量和提高分离精度。
广泛采用程序升温的方法。而在液相色谱中对组分复杂的样品则采用梯度洗脱的方法。进行梯度洗脱可以达到以下目的：缩短分析周期；提高分离能力；峰型得到改善，很少拖尾；增加灵敏度，但有时引起基线漂移。
而此方法用梯度是不可行的。所以等度洗脱在内外标时作用最大。梯度洗脱是等度的辅助，但这些年一般的归一化检测已经取代了等度。
梯度洗脱是指HPLC中通过调整流动相组分的比例对样品进行有效的分离的一种方式。
液相色谱测产品含量都要用梯度方法吗
1、用梯度和等度与流动相也有一定关系。比如正相色谱时是不能用梯度的，在反相色谱时，等度，梯度都可以使用。
2、流动相的成分直接与保留时间有关系，可以得到更好的条件 建议您可以到行业内专业的网站进行交流学习！分析测试百科网乐意为你解答实验中碰到的各种问题，基本上问题都能得到解有问题可去那提问，百度上搜下就有。
3、当被分离组分较复杂时，等梯度洗脱难以将组分很好的分离并完全洗脱，就得考虑梯度洗脱了。液相色谱的梯度洗脱作用类似于气相色谱的程序升温，总之，为了达到更好的分离效果。
4、而在液相色谱中则采用梯度洗脱的方法。在同一个分析周期中，按一定程度不断改变流动相的浓度配比，称为梯度洗脱。从而可以使一个复杂样品中的性质差异较大的组分能按各自适宜的容量因子k达到良好的分离目的。
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